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雞毒支原體(MG)核酸檢測試劑盒(熒光PCR法)

簡要描述:雞毒支原體(MG)核酸檢測試劑盒(熒光PCR法)適用于檢測鼻腔、眶下竇、氣管或氣囊組織、眶下竇和關(guān)節(jié)滲出物或結(jié)膜囊內(nèi)沖洗物、鼻腔、食 管、氣管、泄殖腔和交合器拭子、卵黃囊內(nèi)表面等樣本中的雞毒支原體,用于雞毒支原體感染的輔助診斷。

  • 更新時間:2024-06-26
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 生產(chǎn)地址:上海
  • 訪  問  量:785

詳細(xì)介紹

品牌YLKBIO貨號YLK10006P
規(guī)格50T供貨周期現(xiàn)貨
主要用途科研實驗應(yīng)用領(lǐng)域化工,生物產(chǎn)業(yè)
英文名稱Mycoplasma gallisepticam Detection Kit保存條件-20℃±5℃,避光保存
有效期12個月MG 反應(yīng)液500μL×2 管
MG 陽性質(zhì)控品50μL ×1 管酶液50μL×1 管
陰性質(zhì)控品250μL ×1 管

雞毒支原體(MG)核酸檢測試劑盒(熒光PCR法)


商品名稱:雞毒支原體(MG)核酸檢測試劑盒(熒光PCR法)

Name :Mycoplasma gallisepticam Detection Kit (Real-Time PCR Method)

【包裝規(guī)格】50T/盒

【預(yù)期用途】

雞毒支原體(Mycoplasma gallisepticum, MG)是引起雞慢性呼吸道疾病的主要病原,引起雞呼吸道粘膜卡他性炎癥,造成肉雞胴體品質(zhì)下降,種雞產(chǎn)蛋率、受精率和孵化率下降等。MG 是高度傳染性病原,可隨塵粒、空氣和羽毛在雞群中水平傳播,也可隨種蛋垂直傳播。MG 定植雞的呼吸道后,導(dǎo)致呼吸道上皮細(xì)胞纖毛活動減弱或停滯,引起雞群繼發(fā)大腸桿菌感染或雞新城疫病毒、傳染性支氣管炎病毒感染,引起嚴(yán)重的并發(fā)癥,導(dǎo)致雞群死亡率增高,給養(yǎng)雞業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。

本試劑盒適用于檢測鼻腔、眶下竇、氣管或氣囊組織、眶下竇和關(guān)節(jié)滲出物或結(jié)膜囊內(nèi)沖洗物、鼻腔、食   管、氣管、泄殖腔和交合器拭子、卵黃囊內(nèi)表面等樣本中的雞毒支原體,用于雞毒支原體感染的輔助診斷。

【檢驗原理】

本試劑盒對雞毒支原體基因保守區(qū)設(shè)計特異性的引物和探針,用熒光 PCR 技術(shù)對雞毒支原體的核酸進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測,用于臨床上對可疑感染病料的病原學(xué)診斷。

【試劑組成】

包裝規(guī)格

50T/盒

MG 反應(yīng)液

500μL×2 管

酶液

50μL×1 管

MG 陽性質(zhì)控品

50μL ×1 管

陰性質(zhì)控品

250μL ×1 管

說明:不同批號的試劑盒組分不可交互使用

【儲存條件及有效期】

-20℃±5℃,避光保存、運輸、反復(fù)凍融次數(shù)不超過 5 次,有效期 12 個月。

【適用儀器】

ABI7500、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。

【標(biāo)本采集】

病死或撲殺禽,從鼻腔、眶下竇、氣管或氣囊取樣,也可吸取眶下竇和關(guān)節(jié)滲出物或結(jié)膜囊內(nèi)沖洗物;活   禽從鼻腔、食管、氣管、泄殖腔和交合器中取樣;雞胚從卵黃囊內(nèi)表面、口咽和氣囊采樣。

【保存和運輸】

采集或處理好的樣品在 2℃~8℃條件下保存應(yīng)不超過 24 h;若需長期保存,應(yīng)放置-70℃以下保存,凍融不超過 3 次。

【使用方法】

1.  樣品處理(樣本處理區(qū))

1.1  樣本前處理

組織樣品:每份組織分別從 3 個不同的位置稱取樣品約 1g,手術(shù)/剪剪碎混勻后取 0.5g 于研磨器中研磨,加入 1.5mL 生理鹽水后繼續(xù)研磨,待勻漿后轉(zhuǎn)至 1.5mL 滅菌離心管中,8000rpm 離心 2min,取上清液 100μL 于 1.5mL滅菌離心管中;液體樣品,直接取 100μL 提取。

1.2  核酸提取

推薦采用公司生產(chǎn)的核酸提取/或純化試劑(磁珠法或離心柱法)進(jìn)行核酸提取,請    按照試劑說明書進(jìn)行操作。

2.  試劑配制(試劑準(zhǔn)備區(qū))

根據(jù)待檢測樣本總數(shù),設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對照+1 管陽性對照;反應(yīng)管數(shù)每滿 10 份,多配制 1 份),每測試反應(yīng)體系配制如下表:

試劑

MG 反應(yīng)液

酶液

用量(樣本數(shù)為 N)

19μL

1μL

將混合好的測試反應(yīng)液分裝到 PCR 反應(yīng)管中,20μL/管。

3.  加樣(樣本處理區(qū))

將步驟 1 提取的核酸、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 5μL,分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中,蓋好管蓋,混勻, 短暫離心。


 

4.  PCR 擴(kuò)增(核酸擴(kuò)增區(qū))

4.1  將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi);

4.2  設(shè)置好通道、樣品信息,反應(yīng)體系設(shè)置為 25μL;

熒光通道選擇: 檢測通道(Reporter Dye)FAM, 淬滅通道(Quencher Dye)NONE,ABI 系列儀器請勿選擇

ROX 參比熒光,選擇 None 即可。

4.3  推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置:

步驟

循環(huán)數(shù)

溫度

時間

收集熒光信號

1

1 cycle

95℃

2min

2

45 cycles

95℃

15sec

60℃

30sec

5.  結(jié)果分析判定

5.1  結(jié)果分析條件設(shè)定(請參照各儀器使用說明書進(jìn)行設(shè)置,以分析 ABI7500 儀器為例)

反應(yīng)結(jié)束后自動保存結(jié)果,根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 Start 值、End 值以及 Threshold 值(用戶可根據(jù)實際情況自行調(diào)整,Start 值可設(shè)在 3~15、End 值可設(shè)在 5~20,使閾值線位于擴(kuò)增曲線指數(shù)期,陰性質(zhì)控品的擴(kuò)增曲線平直或低于閾值線),點擊 Analyze 自動獲得分析結(jié)果。

5.2  結(jié)果判斷

陽性:檢測通道 Ct 值≤40,且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線; 陰性:樣本檢測結(jié)果 Ct 值>40 或無 Ct 值。

5.3  質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

陰性質(zhì)控品:無特異性擴(kuò)增曲線或無 Ct 值顯示;

陽性質(zhì)控品:擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)增長期,且 Ct 值≤32; 以上條件應(yīng)同時滿足,否則實驗視為無效。

6.  檢測方法的局限性

1. 樣本檢測結(jié)果與樣本收集、處理、運送以及保存質(zhì)量有關(guān);

2. 樣本提取過程中沒有控制好交叉污染,會出現(xiàn)假陽性結(jié)果;

3. 陽性對照、擴(kuò)增產(chǎn)物泄漏,會導(dǎo)致假陽性結(jié)果;

4. 病原體在流行過程中基因突變、重組,會導(dǎo)致假陰性結(jié)果;

5. 不同的提取方法存在提取效率差異,會導(dǎo)致假陰性結(jié)果;

6. 試劑運輸,保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測效能下降,出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準(zhǔn)確的結(jié)果;

7. 本檢測結(jié)果僅供參考,如須確診請結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測手段。

【注意事項】

1. 所有操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行;

2. 試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化,wan全混勻并短暫離心;

3. 反應(yīng)液應(yīng)避光保存;

4. 反應(yīng)中盡量避免氣泡存在,管蓋需蓋緊;

5. 使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服;

6. 樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進(jìn)行,以免交叉污染;

7. 實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器;

8. 試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對待,并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實驗室生物安全通則》進(jìn)行處理。

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